血友病模型

血友病爲一組遺傳性凝血功能障礙的出血性疾病,其共同的特征是活性凝血活酶生成障礙,凝血時間延長,終身具有輕微創傷後出血傾向,重症患者沒有明顯外傷也可發生“自發性”出血。鼎博彩票可提供F8與F9基因敲除小鼠模型。

基因工程成品小鼠模型

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血友病爲一組遺傳性凝血功能障礙的出血性疾病,其共同的特征是活性凝血活酶生成障礙,凝血時間延長,終身具有輕微創傷後出血傾向,重症患者沒有明顯外傷也可發生“自發性”出血。鼎博彩票可提供F8與F9基因敲除小鼠模型。

FVIII基因敲除小鼠模型

血友病A是由凝血因子VIII(FVIII)缺乏和(或)其功能障碍所引起的X连锁隐性遗传性出血病。人的FVIII基因位于X染色体上,全长186kb,由26个外显子组成。临床研究表明,血友病A主要是由于FVIII基因的點突變、基因倒置、小段基因的缺失和插入造成的。


鼎博彩票生物自主研发的FVIII基因敲除小鼠是在小鼠胚胎干细胞(SCR012,来源于129S6/SVEV)上以同源重组方式造成内源FVIII基因序列部分缺失(16~19外显子),进而通过四倍体补偿技术获得完全胚胎干细胞来源的FVIII基因敲除小鼠,该小鼠进一步与C57 BL/6J小鼠交配育种,品系名稱:B6.129-F8tm1Smoc,品系編號:NM-KO-00012(進入訂購頁面)


經實驗證實FVIII基因敲除小鼠具有典型的血友病A表型:

  • 在進行小鼠剪尾和腳趾編號時,若不給予及時的止血處理,雄性雜合子小鼠和雌性純合子小鼠會因大量失血而死亡。

  • FVIII活性檢測顯示(Fig5),雄性雜合子(-/y)和雌性純合子(-/-)小鼠的FVIII的活性僅爲野生型(wt)小鼠的8%和10%,而雌性雜合子小鼠的活性爲野生型小鼠的80%。

  • 激活的部分凝血活酶時間(APTT)檢測顯示(Fig6),雌性雜合子小鼠的APTT時間比野生型小鼠的略有延長,而雄性雜合子(-/y)和雌性純合子(-/-)小鼠的APTT值均大于120秒。


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Fig1. FVIII基因敲除小鼠构建策略示意图


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Fig2. FVIII基因敲除小鼠基因型鉴定PCR结果


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Fig3. FVIII基因敲除小鼠FVIII mRNA表达水平检测结果


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Fig4. FVIII基因敲除小鼠免疫组化染色结果


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    Fig5. FVIII基因敲除小鼠FVIII活性检测


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    Fig6. FVIII基因敲除小鼠APTT检测


    FVIII基因敲除小鼠是在整體動物水平研究血友病A發病機制和藥物篩選的理想動物模型,可以爲血友病A治療藥物的篩選和評價、血友病A的基因治療等研究提供理想的動物模型和新的實驗手段。爲進一步闡述疾病發生機制、疾病防治藥物的評價篩選和新療法的研發提供了有效工具。


    F9基因敲除小鼠模型

    血友病B是由凝血因子IX(FIX)缺乏和(或)其功能障礙所引起的X連鎖隱性遺傳性出血病。人的FIX基因位于X染色體上,全長31kb,由8個外顯子組成。通過CRISPR/Cas9技術介導的非同源重組修複,造成蛋白翻譯移碼突變並提前終止。點擊此處進入F9-KO訂購頁面


    實驗數據:

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    Fig7 F9构建策略图。


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    Fig8?F9 mRNA在WT和KO小鼠品系肝组织中的表达。


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    Fig9?WT和KO小鼠品系血漿中FIX蛋白的濃度。

    Data in c and d were acquired from 8 mice per group, and are shown as the mean ± the s.d.

    Twotailed unpaired Student’s t tests were used to determine the P value.**P < 0.01


    A型血友病(HA)小鼠凝血實驗套餐詳情

    實驗動物

    血友病组:F8 或 F9 基因敲除小鼠

    對照組:野生型C57BL/6J

    實驗方法

    1、小鼠断尾实验(Tail-clip assays)

    2、活化部分凝血酶原時間測定(APTT)

    3、纖維蛋白原測定(FIB)

    4、二聚體檢測(D-Dimer)

    流程簡介

    小鼠環境適應1周,按分組進行給藥,給藥15min後,進行凝血實驗,每天實驗20只小鼠。凝血實驗結束後,小鼠恢複2周(此間HA小鼠可能會陸續死亡約30%),再次給藥,15min後,摘眼球取全血,分離血漿,進行APTT、FIB,ELISA檢測DD二聚體檢測。


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